EuroFlow

EuroFlow je asociace, která byla založena v roce 2005 jako EU-FP6 financovaný projekt, který byl odstartován na jaře roku 2006. Zpočátku bylo Euroflow tvořeno 18 dignostickými výzkumnými skupinami a dvěma SME (anglicky Small an Medium Enterprises, česky Malé a střední podniky), celkově z 8 různých evropských zemí, se vzájemně se doplňujícími znalostmi na poli průtokové cytometrie a imunofenotypizace leukémií. Během roku 2012 obě SME projekt opustily a EuroFlow tak zanechaly plně vědecky nezávislým. Cílem EuroFlow je inovace a standardizace průtokové cytometrie tak, aby došlo ke zlepšení a pokroku při diagnóze a individualizaci léčby pacientů trpících zhoubnými nádorovými onemocněními krevního původu (dále hematologické malignity, například leukémie a lymfomy).

Historie

Od 90. let se imunofenotypizace pomocí protilátek konjugovaných s fluorochromy a jejich následná detekce průtokovým cytometrem stala preferovanou metodou při diagnóze hematologických malignit. Výhodou této metody je rychlost a nenáročnost a také možnost detekovat vice jak 6 parametrů současně, dále také široká aplikovatelnost v lékařské diagnostice a přesné zaměření na nádorové populace. Vzhledem k rychlému vývoji nových protilátek, fluorochromů a mnohobarevných digitálních cytometrů se stalo důležitou otázkou, jak cytometrická data správně interpretovat a jak dosáhnout standardizovaných a srovnatelných výsledků mezi laboratořemi. I přesto, že byl zaveden jistý konsensus doporučení a směrnic, jednalo se jen o částečnou standardizaci, nebral se ohled na různé zdroje reagencií (hlavně klony protilátek, fluorochromy a jejich optimální kombinace) nebo na postup přípravy vzorků. Vzhledem k těmto mezilaboratorním rozdílům je cytometrie vnímána jako metoda vysoce závislá na odbornosti s limitovanou reprodukovatelností při studiích probíhajích ve více centrech.

Cíle Euroflow

  • Vývoj a validace nových protilátek
  • Zavedení nové technologie založené na kuličkových testech (sendvičové imunostanovení na kuličkách)
  • Vývoj nových softwarových nástrojů a z toho plynoucí nové analytické přístupy pro rozpoznávání komplexních imunofenotypových vzorců
  • Design nových vícebarevných protokolů a standardních operačních procedur (SOP)
  • Vývoj a standardizace rychlé, přesné a vysoce citlivé průtokové cytometrie[1]

Dosažené cíle

Během uplynulých let dosáhlo EuroFlow většiny svých cílů. Ustanovilo osmibarevné panely protilátek pro diagnostiku, klasifikaci a následné kontrolní vyšetření hematologických malignit[2]. Panely jsou tvořeny testovací zkumavkou a několika doplňujícími charakterizačními zkumavkami a jsou založeny na zkušenostech a literatuře. Jsou i nadále optimalizovány a rozsáhle testovány na velkých souborech vzorků paralelně v několika výzkumných centrech konsorcia EuroFlow. Proběhla selekce fluorochromů i standardizace nastavení přístroje a laboratorních protokolů, tedy celkový vývoj standardizovaných operačních procedur[3]. Klony protilátek a fluorochromy a další reagencie od různých výrobců byly podstoupeny detailnímu testování a srovnání. Zároveň byl pro analýzu těchto obsáhlých a komplexních dat vyvinutý software schopný multidimenzionálního statistického srovnávání dat normálních vzorků (zdravých kontrol) se vzorky pacientů[4][5]. Dále byly vyvinuté nové klony protilátek proti pečlivě vybraným epitopům fúzních proteinů, které jsou typické pro chromozomální translokace (detekce nejfrekventovanějších fúzních proteinů) při akutních leukémiích a chronické myeloidní leukémie a byla zavedená detekce fúzních proteinů pomocí kuličkových testů[6][7][8]

Odkazy

Reference

  1. ↑ VAN DONGEN, J. J.; ORFAO, A. EuroFlow: Resetting leukemia and lymphoma immunophenotyping. Basis for companion diagnostics and personalized medicine. Leukemia.. 2012, roč. 26, čís. 9, s. 1899–907. Dostupné online. ISSN 1476-5551. 
  2. ↑ VAN DONGEN, J. J.; LHERMITTE, L.; BÖTTCHER, S., et al. EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes. Leukemia.. 2012, roč. 26, čís. 9, s. 1908–75. Dostupné online. ISSN 1476-5551. 
  3. ↑ KALINA, T.; FLORES-MONTERO, J.; VAN DER VELDEN, V. H., et al. EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols. Leukemia.. 2012, roč. 26, čís. 9, s. 1986–2010. Dostupné online. ISSN 1476-5551. 
  4. ↑ PEDREIRA, C. E.; COSTA, E. S.; BARRENA, S., et al. Generation of flow cytometry data files with a potentially infinite number of dimensions. Cytometry A.. 2008, roč. 73, čís. 9, s. 834–46. Dostupné online. ISSN 1552-4930. 
  5. ↑ COSTA, E. S.; PEDREIRA, C. E.; BARRENA, S., et al. Automated pattern-guided principal component analysis vs expert-based immunophenotypic classification of B-cell chronic lymphoproliferative disorders: a step forward in the standardization of clinical immunophenotyping. Leukemia.. 2010, roč. 24, čís. 11, s. 1927–33. Dostupné online. ISSN 1476-5551. 
  6. ↑ DEKKING, E.; VAN DER VELDEN, V. H.; BÖTTCHER, S., et al. Detection of fusion genes at the protein level in leukemia patients via the flow cytometric immunobead assay. Best Pract Res Clin Haematol.. 2010, roč. 23, čís. 3, s. 333–45. Dostupné online. ISSN 1532-1924. 
  7. ↑ DEKKING, E. H.; VAN DER VELDEN, V. H.; VARRO, R., et al. Flow cytometric immunobead assay for fast and easy detection of PML-RARA fusion proteins for the diagnosis of acute promyelocytic leukemia. Leukemia.. 2012, roč. 26, čís. 9, s. 1976–85. Dostupné online. ISSN 1476-5551. 
  8. ↑ WEERKAMP, F.; DEKKING, E.; NG, Y. Y., et al. Flow cytometric immunobead assay for the detection of BCR-ABL fusion proteins in leukemia patients. Leukemia.. 2009, roč. 23, čís. 6, s. 1106–17. Dostupné online. ISSN 1476-5551. 

Externí odkazy

Zdroj